pulse chase experiment

כאן בתמונות ניתן לראות את הפרפרט של המושבה השטוחה של אלמוג מסוג סטילופורה.

בפריים המרכזי בתמונה השמאלית ניתן לראות את רקמת האלמוג הפרושה על גבי השלד. ובחוץ ניתן לראות את מי הים החיצוניים אשר מחוץ לחיה.

בצדדים ניתן לראות פרופיל z-stack אורטוגונלי של אותו אזור , שזהו בעצם חתך צד של הz-stack

אפשר לראות את קו הגבישים , כאשר משמאל לקו הגבישים זהו השלד אשר עבה יותר באזור העליון ונהיה יותר דק כככל שמתקרבים לקצה

ומימים לקו הגבישים זוהי הרקמה המונחת על גבי השלד. ניתן לראות את הגלימה הפרוסה מעבר לשלד ונחה על הזכוכית.

מימין ניתן לראות ניסוי Pulse chase הכוונה בניסוי Pulse chase , היא שבזמן הצפייה במיקרוסקופ , אנחנו עושים pulse של צבען לתוך הצלוחית עם האלמוג, ותחת המיקרוסקופ ,מסתכלים על הדינאמיקה של חדירת הצבען לתוך האלמוג. הכוונה ב chase היא שאנו מחליפים את המים החיצוניים אשר מסומנים בפרוב , במי ים חדשים ללא פרוב , ומסתכלים על דינאמיקת יציאת הצבען מהאלמוג אל מי הים החיצוניים.

בכל אופן ניתן לראות פה תמונת z-stack של האלמוג 6 דקות לאחר שהוזרק fitc –dex למי הים החיצוניים. מה שאנחנו רואים שמי הים החיצוניים סומנו בפרוב הפלורוסנטי וכן שיש כניסה של הסמן לאזור שמתחת לאותו קו גבישים שראינו קודם , מה שמעיד שהפרוב ניכנס לאזור השלד.

גראדינט הצבע הוא מתוח פנים השלד החוצה מה שמעיד שהמקור הוא לאו דוקא משולי הריקמה.

כעט זה סרט שצולם למשך 25 דקות , 18 דקות לאחר הוספת הfitc . כאשר קצב דגימת פריים הוא של 30 שניות.

בסרט זה ניתן לראות כיצד לפתע מופיע הצבען באזור החלל הקליקובלסטי.

כאן אפשר לראות עיבוד שנעשה על הסרט , סומנו שני אזורים , אזור אחד בתוך אזור האלמוג ואזור שני מחוץ לאלמוג במים החיצוניים.מתוך שני האזורים האלה ייצרנו גרף ובגרף ניתן לראות את עוצמת הצבע הירוק יחסית לזמן בשני האזורים שנבחרו , מה שניתן לראות הוא שלאחר בערך 800 שניות יש עלייה בצבע הירוק באזור החלל הקליקובלסטי ובמקביל ירידה בכמות הצבע הירוק במי הים החיצוניים , הירידה בצבע במי הים החיצוניים היא כנראה בעקבות יציאה של מי חסרי צבען מתוך האלמוג ודילול הפלורוסנטיות של המים החיצוניים,ובגדול ניתן לראות שיחלוף מי ים פנימיים בחלל הקליקובלסטי.

כעת זוהי תמונת z-stack 3 דקות לאחר החלפת המים החיצוניים במים נקיים,כלומר לאחר הchase ניתן לראות שמי הים אשר בחלל הקליקובלסטי כבר השתחלפו ואילו אזור הרקמה מראה פלורוסנטיות אשר לא הייתה קיימת לפני כן, מה שכנראה מעיד על נוכחות של צבען בצורה כלשהי בתוך הרקמה , ועל זה אנחנו נדבר מאוחר יותר. מה שעוד ניתן לראות בתמונה זו זה שליד הרקמה במים החיצוניים יש מעין דליפה של צבען אל המים החיצוניים מתוך אזור הרקמה.

מבחינת דינאמיקת יציאת הצבען זהו סרט שצולם למשך 25 דקות , 13 דקות לאחר ה chase .קצב דגימה 30 שניות.

כעת באנליזה שנערכה על הסרט ניתן לראות שבאזור החלל הקליקובלסטי אין שינוי לאורך זמן בצבע הפלורוסנטי ואילו במים החיצוניים יש עלייה הדרגתית בכמות החומר הפלורוסנטית , כאשר מייד לאחר התפשטות הרקמה יש עלייה של הצבען בחוץ מה שמעיד כנראה על פליטה אקטיבית של חומר פלורסנטי.